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甘藍(lán)SI相關(guān)基因BoCDPK14的克隆與分析

白曉璟; 廉小平; 王玉奎; 張賀翠; 劉倩瑩; 左同鴻; 張以忠; 謝琴琴; 胡燈科; 任雪松; 曾靜; 羅紹蘭; 蒲敏; 朱利泉 西南大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院; 重慶400716; 西南大學(xué)園藝園林學(xué)院; 重慶400716; 長江師范學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院; 重慶408100
  • 甘藍(lán)
  • bocdpk14基因
  • 酵母雙雜交
  • 自花授粉
  • 自交不親和

摘要:甘藍(lán)自交不親和性(self-incompatibility,SI)是柱頭對相同單倍型的花粉產(chǎn)生的排斥或抑制反應(yīng)。鈣依賴蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase,CDPK)是植物面對逆境信號時參與抗逆反應(yīng)的重要元件。本文通過甘藍(lán)自花授粉0~60 min的柱頭轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析,成功地篩選到一個受自花授粉誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)的基因BoCDPK14,該基因與擬南芥中參與植物逆境信號傳導(dǎo)的鈣依賴蛋白激酶基因高度同源。BoCDPK14基因開放閱讀框1599 bp,編碼一種具有533個氨基酸殘基的親水性蛋白,可在大腸桿菌胞質(zhì)中被誘導(dǎo)表達(dá),其相對分子質(zhì)量為60.4 kD,表明BoCDPK14為活性胞質(zhì)蛋白。該基因起始密碼子上游2000 bp的核苷酸序列中含有脅迫反應(yīng)、激素反應(yīng)、代謝調(diào)節(jié)等應(yīng)答元件。BoCDPK14在甘藍(lán)柱頭、花粉、花蕾、花瓣和葉片中表達(dá),且柱頭中的表達(dá)量低于花粉。熒光定量PCR結(jié)果證實,BoCDPK14在0~60 min的表達(dá)變化趨勢與轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果一致。通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn),BoCDPK14蛋白激酶結(jié)構(gòu)域與谷氨酸受體通道蛋白BoGLR2.8d存在相互作用,表明BoCDPK14可能是參與SI反應(yīng)過程的新蛋白。本研究結(jié)果表明BoCDPK14可能作為Ca2+信號元件參與甘藍(lán)柱頭響應(yīng)花粉刺激的分子過程,這為甘藍(lán)自交不親和的進(jìn)一步研究和利用提供了新內(nèi)容。

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