摘要：豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是目前影響?zhàn)B豬業(yè)的重要病毒之一,國內(nèi)PRRSV是以美洲型為主,根據(jù)致病性的強弱又可分為高致病性(HP)和經(jīng)典性PRRSV毒株,高致病性PRRSV是引起國內(nèi)2006年'豬高熱病'的主要病原。PRRSV屬于條件性致病病毒,對PRRSV感染豬和發(fā)病豬的準確、快速檢測是采取有效措施的前提和依據(jù)。環(huán)介導等溫擴增技術(shù)(LAMP)是一種敏感、快速、操作相對簡便的核酸擴增技術(shù),整個反應(yīng)在單一溫度下進行,反應(yīng)結(jié)果可以通過肉眼觀察,在動物病原檢測方面應(yīng)用較多。本試驗通過GenBank獲得了HP-PRRSV和經(jīng)典PRRSV分離株序列,選擇2種毒株共同的保守基因區(qū)段,設(shè)計了用于檢測PRRSV的RT-LAMP引物。通過對反應(yīng)體系、反應(yīng)溫度、特異性、敏感性等優(yōu)化,建立了檢測PRRSV的RT-LAMP方法。建立的方法總體系為25μL,外引物終濃度為0.20μmol/L、內(nèi)引物終濃度為1.60μmol/L,63.0℃恒溫作用1 h,給反應(yīng)產(chǎn)物中加入1μL SYBR GreenⅠ,陽性結(jié)果呈綠色,紫外光下可見熒光,陰性結(jié)果呈橙色,紫外光下無熒光。方法對PRRSV RNA的最低檢測質(zhì)量濃度為9.44×10-5 mg/L。用建立的方法對臨床送檢的19份豬樣品(血清和組織)進行檢測,與國標(GB/T 27517-2011)的HP-PRRSV和PRRSV雙重RT-PCR檢測方法進行對比,雙重RT-PCR方法檢測出6份陽性,RT-LAMP方法檢測出8份陽性。本試驗建立了檢測PRRSV經(jīng)典毒株和高致病毒株的RT-LAMP方法,為PRRSV的檢測提供了可選擇的方法。