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不同種屬小鼠用于淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)的比較研究

陳亮; 穆鈺峰; 邵安良; 魏麗娜; 屈樹新; 徐麗明 中國食品藥品檢定研究院; 北京102629; 西南交通大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院; 成都611756
  • 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)
  • gal抗原缺失小鼠
  • ggta1基因敲除
  • 動(dòng)物源性生物材料

摘要:目的:對(duì)使用不同種屬小鼠進(jìn)行脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)的適宜性和可比性進(jìn)行研究。方法:分別獲取BALB/c小鼠、野生型C57BL/6(簡稱C57)小鼠、Gal抗原缺失(C57背景,GGTA1基因被敲除)小鼠的脾淋巴細(xì)胞,在確定脾淋巴細(xì)胞數(shù)量與CCK8吸收度的線性范圍后,設(shè)立陽性對(duì)照組(刀豆蛋白A,Con A)、不同稀釋度的動(dòng)物原材料勻漿液和脫細(xì)胞生物材料勻漿液等試驗(yàn)組,使用CCK8檢測淋巴細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞術(shù)測定淋巴細(xì)胞亞型百分比,以確定BALB/c小鼠、野生型C57小鼠和Gal抗原缺失小鼠在體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)的適宜性和可比性。結(jié)果:C57小鼠脾淋巴細(xì)胞數(shù)量和CCK8的吸收度的線性范圍要明顯大于BALB/c小鼠,而BALB/c小鼠線性曲線的斜率明顯大于C57小鼠。從CCK8檢測的淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果看,BALB/c小鼠與C57小鼠相比,2.5μg·mL-1的Con A對(duì)2種小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖均出現(xiàn)明顯刺激作用;牛跟腱(含低水平的Gal抗原)勻漿液對(duì)2種小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖均顯示刺激作用,并顯示出量效關(guān)系;不同稀釋度的膠原海綿(牛跟腱來源)勻漿液對(duì)2種小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖均未顯示刺激作用,表現(xiàn)了一致的結(jié)果,說明沒有淋巴細(xì)胞促增殖作用。另外,來源于Gal抗原缺失小鼠與野生型C57小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞對(duì)Con A、牛心包(含有高水平的Gal抗原)勻漿液均表現(xiàn)出強(qiáng)的增殖反應(yīng)和相似的反應(yīng)強(qiáng)度。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示牛心包勻漿原液組在Gal抗原缺失小鼠僅顯示活化B細(xì)胞百分比與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異,而在野生型C57小鼠組其活化B細(xì)胞、活化T細(xì)胞、活化NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞百分比與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。結(jié)論:CCK8檢測的各試驗(yàn)組淋巴細(xì)胞增殖率結(jié)果在C57小鼠與BALB/c小鼠、Gal抗原缺失小鼠與野生型C57小鼠間具有可比性,表明這些種屬的小鼠均可用于體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)。

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