摘要：目的:建立從糞腸球菌-艱難梭菌混合培養(yǎng)物中分離艱難梭菌的方法。方法:取不同廠家腦心浸出液(BHI)培養(yǎng)基、不同抗生素和是否添加羊血(或血清)3種組分進(jìn)行組合,加入糞腸球菌-艱難梭菌混合物進(jìn)行培養(yǎng);顯微鏡觀察不同組分培養(yǎng)基中細(xì)菌形態(tài),將不同組分培養(yǎng)基中獲得的混合培養(yǎng)物劃線固體平板培養(yǎng)基并培養(yǎng)、觀察菌落形態(tài)及菌落氣味,采用16SrDNA測序技術(shù)評價(jià)不同組合培養(yǎng)基對艱難梭菌的純化效果。結(jié)果:艱難梭菌抗生素抗性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,艱難梭菌對氯霉素、克拉霉素和氨芐青霉素敏感,對四環(huán)素、D-環(huán)絲氨酸和頭孢西丁具有抗性;在相同艱難梭菌接種量條件下,不同生產(chǎn)廠家BHI-酵母粉培養(yǎng)基(BHIS)均有艱難梭菌典型的沉淀生成,并伴有濃烈臭雞蛋氣味;顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)純化前艱難梭菌與糞腸球菌共培養(yǎng)物有大量球菌和鏈球菌、少量桿菌;BHIS-BDC培養(yǎng)基所有視野中無球菌,僅見桿狀細(xì)菌;BHIS培養(yǎng)基上艱難梭菌僅在平板邊緣形成零星菌落,BHIS-BDC培養(yǎng)基表面形成典型艱難梭菌菌落;16SrDNA測序結(jié)果表明1~2mm菌落為糞腸球菌,3~5mm菌落為艱難梭菌。結(jié)論:不同生產(chǎn)廠家的BHIS培養(yǎng)基對艱難梭菌中糞腸球菌的去除沒有明顯差異,BHIS培養(yǎng)基中添加羊血、D-環(huán)絲氨酸與頭孢西丁復(fù)合抗生素可去除艱難梭菌中糞腸球菌污染。