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核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其對肝癌細胞生長的影響

孫達權(quán); 石松; 徐瑩瑩; 雷霆雯; 莫曉川; 王筑婷; 李紅梅; 徐國強 貴州醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室; 貴州貴陽550025; 貴州醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室; 貴州貴陽550025
  • 肝腫瘤
  • 核不均一核糖核蛋白c2
  • 細胞
  • 細胞增殖
  • 真核表達

摘要:目的:探討人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌細胞生長增殖中的作用。方法:采用RTPCR方法擴增肝癌細胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因編碼區(qū)的目的片段,構(gòu)建真核表達載體p EGFP-RNPC2并進行細胞轉(zhuǎn)染;采用G418抗生素篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞,SDS-PAGE和Western blot法測定穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞內(nèi)RNPC2蛋白表達,CCK-8法測定穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞的增殖能力。結(jié)果:從培養(yǎng)的肝癌細胞SMMC-7721中抽提總RNA并反轉(zhuǎn)錄成c DNA,通過RNPC特異性引物擴增出RNPC2基因;測序鑒定獲得雙酶切分離純化目的片段后,插入真核表達載體p EGFP-C1中,成功構(gòu)建真核表達載體p EGFP-RNPC2;通過細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、G418藥物篩選和熒光顯微術(shù)獲得表達外源融合蛋白GFP-RNPC2的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株,并用Western blot驗證及CCK-8分析證明GFP-RNPC2穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞的生長增殖速率增加。結(jié)論:RNPC2可以促進肝癌細胞生長增殖。

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