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表位依賴型急性期戊型肝炎診斷抗原的制備與抗原性分析

蘇秋東; 郭敏卓; 伊瑤; 邱豐; 田瑞光; 畢勝利; 賈志遠 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所; 北京102206; 北京出入境檢驗檢疫局保健中心
  • 多表位抗原
  • 戊型肝炎病毒
  • 原核表達
  • 層析純化
  • 偶聯反應

摘要:目的原核表達制備表位依賴型戊型肝炎診斷抗原,并對其抗原性及其在急性戊肝診斷的性能進行評價。方法以包含密碼子優化的GST、HEV優勢表位的H15質粒為模板,PCR獲取GST-HEV優勢表位片段,將其插人表達質粒pET43.1a中,在大腸桿菌中進行表達;利用親和層析和陰離子交換層析純化目的蛋白;利用Western Blotting技術對目的蛋白抗原性進行鑒定;建立HEV-IgM抗體檢測ELISA方法,初步評價其對陰、陽血清樣本的鑒別能力。結果獲取高度均質的表位依賴型急性戊肝診斷抗原;WB實驗表明目的蛋白不但可以被anti-GST單克隆抗體識別,還可以被戊肝急性期血清相應抗體所識別;分別對60份戊肝急性期血清、陰性血清進行檢測,發現其與臨床和實驗室診斷結果一致性較高。結論原核表達與層析純化可以獲取抗原性優異的表位依賴型急性戊肝診斷抗原,偶聯HRP后可應用于HEV-IgM ELISA血清學檢測。

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