摘要：【目的】建立快速檢測(cè)羅非魚羅湖病毒(Tilapia Lake Virus,Ti LV)的RT-PCR方法。【方法】參照GenBank中羅非魚羅湖病毒全基因序列,依據(jù)其假定蛋白基因片段3設(shè)計(jì)合成1對(duì)特異性擴(kuò)增引物,提取羅湖病毒RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,通過(guò)優(yōu)化擴(kuò)增條件和擴(kuò)增體系,建立快速檢測(cè)羅非魚羅湖病毒的RT-PCR方法。用該方法對(duì)自然感染羅湖病毒發(fā)病的羅非魚樣品進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。【結(jié)果】RT-PCR擴(kuò)增得到與試驗(yàn)設(shè)計(jì)相符的499 bp的特異性目的條帶,而對(duì)健康羅非魚、野生羅非魚及其他病毒對(duì)照組的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。測(cè)序比對(duì)結(jié)果表明,該方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確,最低可檢測(cè)出約10fg/mL的質(zhì)粒DNA,具有較好的特異性和較高的敏感性。用該方法對(duì)332份臨床樣品進(jìn)行RT-PCR檢測(cè),其中36份樣品擴(kuò)增出特異性的目的條帶,經(jīng)測(cè)序比對(duì),檢測(cè)結(jié)果正確。【結(jié)論】建立的檢測(cè)方法可用于TiLV的檢測(cè)。